Mga Prinsipyo ug Pamaagi sa Quantitative Analysis pinaagi sa Liquid Chromatography

Ang mekanismo sa pagbulag sa liquid chromatography gibase sa kalainan sa affinity sa mga sangkap sa sagol alang sa duha ka hugna.

Sumala sa lain-laing mga stasionary phase, ang liquid chromatography gibahin ngadto sa liquid-solid chromatography, liquid-liquid chromatography ug bonded phase chromatography.Ang labing kaylap nga gigamit mao ang liquid-solid chromatography nga adunay silica gel isip filler ug bonded phase chromatography nga adunay microsilica isip matrix.

Sumala sa porma sa naghunong nga hugna, ang liquid chromatography mahimong bahinon sa column chromatography, paper chromatography ug thin layer chromatography.Sumala sa kapasidad sa adsorption, kini mahimong bahinon ngadto sa adsorption chromatography, partition chromatography, ion exchange chromatography ug gel permeation chromatography.

Sa bag-ohay nga mga tuig, ang usa ka high-pressure liquid flow system gidugang sa liquid column chromatography system aron ang mobile phase paspas nga modagayday ubos sa high pressure aron mapalambo ang separation effect, mao nga high-efficiency (nailhan usab nga high-pressure) liquid chromatography. nitumaw na.

BAHIN
01 Prinsipyo sa Quantitative Analysis sa Liquid Chromatography

Sa pag-ihap pinasukad sa kwalitatibo, lunsay nga mga substansiya gikinahanglan isip mga sumbanan;

Ang liquid chromatography quantification usa ka medyo quantitative nga pamaagi: nga mao, ang gidaghanon sa analyte sa sagol gibanabana gikan sa nahibal-an nga gidaghanon sa puro nga standard sample

BAHIN
02 Basihan sa Pag-ihap pinaagi sa Liquid Chromatography

Ang gidaghanon sa gisukod nga component (W) kay proporsyonal sa tubag nga bili (A) (peak height o peak area), W=f×A.

Quantitative correction factor (f): Kini ang proportionality constant sa quantitative calculation formula, ug ang pisikal nga kahulogan niini mao ang kantidad sa gisukod nga component nga girepresentahan sa unit response value (peak area).

Ang quantitative correction factor mahimong makuha gikan sa nahibal-an nga gidaghanon sa standard sample ug ang tubag niini.

Sukda ang kantidad sa tubag sa wala mailhi nga sangkap, ug ang kantidad sa sangkap mahimong makuha pinaagi sa quantitative correction factor.

BAHIN
03 Mga komon nga termino sa quantitative analysis

Sample (sample): usa ka solusyon nga adunay analyte alang sa chromatographic analysis.Gibahin sa standard ug wala mailhi nga mga sample.

Standard: Usa ka lunsay nga produkto nga adunay nahibal-an nga konsentrasyon.Wala mailhi nga sample (wala nahibal-an): Ang sagol nga ang konsentrasyon kinahanglan sulayan.

Sample nga gibug-aton: Ang orihinal nga pagtimbang sa sample nga sulayan.

Dilution: Ang dilution factor sa wala mailhi nga sample.

Component : ang chromatographic peak nga quantitatively analysed, nga mao, ang analyte kansang sulod wala mailhi.

Gidaghanon sa sangkap (kadaghanon): ang sulud (o konsentrasyon) sa sangkap nga sulayan.

Integerity : Ang computational nga proseso sa pagsukod sa peak area sa chromatographic peak pinaagi sa computer.

Calibration curve: Usa ka linear curve sa component content versus response value, nga gitukod gikan sa usa ka nailhan nga gidaghanon sa standard substance, nga gigamit sa pagtino sa wala mailhi nga content sa analyte.

BAHIN
04 Quantitative Analysis sa Liquid Chromatography

1. Pagpili og chromatographic nga pamaagi nga angay alang sa quantitative analysis:

l Kumpirma ang peak sa nakit-an nga sangkap ug makab-ot ang usa ka resolusyon (R) nga labaw sa 1.5

l Tinoa ang pagkamakanunayon (kaputli) sa chromatographic peak sa gisulayan nga mga sangkap

l Tinoa ang limitasyon sa detection ug limitasyon sa quantification sa pamaagi;pagkasensitibo ug linear range

2. Paghimo ug calibration curve nga adunay standard samples sa lain-laing konsentrasyon

3. Susiha ang katukma ug katukma sa quantitative nga mga pamaagi

4. Gamita ang katugbang nga software sa pagdumala sa chromatography aron ipatuman ang pagkolekta sa sample, pagproseso sa datos ug mga resulta sa pagtaho

BAHIN
05 Pag-ila sa quantitative peak (kwalitatibo)

Kwalitatibo nga pag-ila sa matag chromatographic peak aron ma-quantified

Una, gamita ang standard sample aron matino ang retention time (Rt) sa chromatographic peak nga ma-quantified.Pinaagi sa pagtandi sa oras sa pagpabilin, pangitaa ang sangkap nga katumbas sa matag chromatographic peak sa wala mailhi nga sample.Ang chromatographic qualitative nga pamaagi mao ang pagtandi sa retention time sa standard sample.Ang kriterya Dili igodugang kumpirmasyon (kwalitatibo)

1. Standard nga pamaagi sa pagdugang

2. Gamita ang uban nga mga pamaagi sa samang higayon: ubang mga pamaagi sa chromatographic (bag-ohon ang mekanismo, sama sa: gamit ang lain-laing mga chromatographic column), uban pang mga detector (PDA: spectrum comparison, spectrum library search; MS: mass spectrum analysis, spectrum library search)

3. Ubang mga instrumento ug pamaagi

BAHIN
06 Pagkumpirma sa Quantitative Peak Consistency

Kumpirma ang chromatographic peak consistency (purity)

Siguroha nga adunay usa lamang ka gisukod nga sangkap ubos sa matag chromatographic peak

Susiha ang interference gikan sa co-eluting substances (mga hugaw)

Mga Pamaagi sa Pagkumpirma sa Chromatographic Peak Consistency (Purity)

Pagkumpara sa Spectrograms sa Photodiode Matrix (PDA) Detector

Pag-ila sa Kinatas-ang Kaputli

2996 Teorya sa Anggulo sa Kaputli

Ang mga pamaagi nga sagad gigamit sa BAHIN 07

Standard curve nga pamaagi, gibahin ngadto sa external standard nga pamaagi ug internal standard nga pamaagi:

1. External standard nga pamaagi: labing gigamit sa liquid chromatography

Usa ka serye sa mga sumbanan nga mga sample sa nahibal-an nga mga konsentrasyon ang giandam gamit ang puro nga mga sample sa mga compound nga sulayan ingon mga sumbanan nga sample.giindyeksyon sa kolum hangtod sa kantidad sa tubag niini (peak area).
Sulod sa usa ka piho nga range, adunay usa ka maayo nga linear nga relasyon tali sa konsentrasyon sa standard sample ug sa tubag nga bili, nga mao ang W= f×A, ug usa ka standard curve ang gihimo.

Ubos sa eksaktong parehas nga mga kondisyon sa eksperimento, i-inject ang wala mailhi nga sample aron makuha ang tubag nga kantidad sa sangkap nga sukdon.Sumala sa nahibal-an nga coefficient f, ang konsentrasyon sa sangkap nga sukdon mahimong makuha.

Ang mga bentaha sa eksternal nga standard nga pamaagi:yano nga operasyon ug kalkulasyon, kini usa ka sagad nga gigamit nga quantitative nga pamaagi;dili kinahanglan alang sa matag sangkap nga makit-an ug matunaw;gikinahanglan ang standard sample;ang mga kondisyon sa pagsukod sa standard sample ug wala mailhi nga sample kinahanglan nga makanunayon;ang gidaghanon sa indeyksiyon kinahanglan nga tukma.

Mga disbentaha sa gawas nga standard nga pamaagi:Ang mga kondisyon sa eksperimento gikinahanglan nga taas, sama sa pagkasensitibo sa detector, ang flow rate, ug ang komposisyon sa mobile phase dili mausab;ang gidaghanon sa matag indeyksiyon kinahanglan nga adunay maayo nga repeatability.

2. Internal nga standard nga pamaagi: tukma, apan makasamok, labing gigamit sa standard nga mga pamaagi

Ang nahibal-an nga kantidad sa internal nga sumbanan gidugang sa sumbanan aron makahimo usa ka managsama nga sumbanan, ug usa ka serye sa mga sumbanan sa pagtrabaho nga nahibal-an nga konsentrasyon ang giandam.Ang molar ratio sa standard ngadto sa internal nga standard sa mixed standard nagpabilin nga wala mausab.I-inject sa chromatographic column ug kuhaa (standard sample peak area/internal standard sample peak area) isip response value.Sumala sa linear nga relasyon tali sa tubag nga bili ug sa konsentrasyon sa working standard, nga mao ang W= f×A, usa ka standard curve ang gihimo.

Ang nahibal-an nga kantidad sa internal nga sumbanan idugang sa wala mailhi nga sample ug gi-inject sa kolum aron makuha ang tubag nga kantidad sa sangkap nga sukdon.Sumala sa nahibal-an nga coefficient f, ang konsentrasyon sa sangkap nga sukdon mahimong makuha.

Mga kinaiya sa internal nga standard nga pamaagi:Atol sa operasyon, ang sample ug ang internal nga sumbanan gisagol ug gi-inject sa chromatographic nga kolum, mao nga basta ang ratio sa kantidad sa gisukod nga sangkap sa internal nga sumbanan sa sinagol nga solusyon mao ang kanunay, ang pagbag-o sa gidaghanon sa sample dili makaapekto sa quantitative nga mga resulta..Ang internal nga standard nga pamaagi nag-offset sa impluwensya sa sample volume, ug bisan ang mobile phase ug detector, mao nga kini mas tukma kay sa external standard nga pamaagi.

BAHIN
08 Mga Hinungdan nga Makaapektar sa Resulta sa Pag-analisa sa Gidaghanon

Ang dili maayo nga katukma mahimong hinungdan sa:

Sayop nga peak area integration, sample decomposition o impurities nga gipaila sa panahon sa pag-andam sa sample, sample vial nga wala selyado, sample o solvent volatilization, sayop nga pag-andam sa sample, mga problema sa sample injection, sayop nga internal standard nga pagpangandam

Posible nga mga hinungdan sa dili maayo nga katukma:

Sayop nga peak integration, injection o injector nga mga problema, sample decomposition o impurities nga gipaila atol sa sample nga pag-andam, chromatographic nga mga problema, degraded detector response