Ang liquid chromatography mao ang nag-unang pamaagi sa pagsulay sa sulud sa matag sangkap ug mga hugaw sa hilaw nga materyales, intermediate, pagpangandam ug mga materyales sa pagputos, apan daghang mga sangkap ang wala’y sukaranan nga mga pamaagi aron masaligan, mao nga dili kalikayan ang paghimo og bag-ong mga pamaagi. Sa pag-uswag sa mga pamaagi sa liquid phase, ang chromatographic column mao ang kinauyokan sa liquid chromatography, busa kung unsaon pagpili sa usa ka angay nga chromatographic column hinungdanon. Niini nga artikulo, ipasabut sa tagsulat kung giunsa pagpili ang usa ka kolum sa likido nga chromatography gikan sa tulo nga mga aspeto: kinatibuk-ang mga ideya, mga konsiderasyon ug sakup sa aplikasyon.
A. Kinatibuk-ang mga ideya alang sa pagpili sa mga kolum sa liquid chromatography
1. Timbang-timbanga ang pisikal ug kemikal nga mga kabtangan sa analyte: sama sa kemikal nga istruktura, solubility, kalig-on (sama sa kung kini sayon nga ma-oxidized / pagkunhod / hydrolyzed), acidity ug alkalinity, ug uban pa, ilabi na ang kemikal nga istruktura mao ang yawe hinungdan sa pagtino sa mga kabtangan, sama sa conjugated nga grupo adunay kusog nga pagsuyup sa ultraviolet ug kusog nga fluorescence;
2. Tinoa ang katuyoan sa pagtuki: kung ang taas nga pagbulag, taas nga kahusayan sa kolum, mubo nga oras sa pag-analisar, taas nga pagkasensitibo, taas nga resistensya sa presyur, taas nga kinabuhi sa kolum, mubu nga gasto, ug uban pa gikinahanglan;
- Pagpili usa ka angay nga kolum sa chromatographic: sabta ang komposisyon, pisikal ug kemikal nga mga kabtangan sa chromatographic filler, sama sa gidak-on sa partikulo, gidak-on sa lungag, pagtugot sa temperatura, pagtugot sa pH, adsorption sa analyte, ug uban pa.
- Mga konsiderasyon sa pagpili sa mga kolum sa liquid chromatography
Kini nga kapitulo maghisgot sa mga butang nga pagatagdon sa pagpili sa usa ka chromatography column gikan sa panglantaw sa pisikal ug kemikal nga mga kabtangan sa chromatography column mismo. 2.1 Filler matrix
2.1.1 Silica gel matrix Ang filler matrix sa kadaghanang liquid chromatography column mao ang silica gel. Kini nga matang sa filler adunay taas nga kaputli, mubu nga gasto, taas nga mekanikal nga kusog, ug dali nga usbon ang mga grupo (sama sa phenyl bonding, amino bonding, cyano bonding, ug uban pa), apan ang pH nga kantidad ug temperatura nga gitugot niini limitado: ang Ang pH range sa kadaghanan sa silica gel matrix fillers mao ang 2 ngadto sa 8, apan ang pH range sa espesyal nga giusab nga silica gel bonded phases mahimong sama ka lapad sa 1.5 ngadto sa 10, ug adunay usab espesyal nga giusab nga silica gel bonded phases nga lig-on sa ubos nga pH, sama sa Agilent ZORBAX RRHD stablebond-C18, nga stable sa pH 1 hangtod 8; ang taas nga limitasyon sa temperatura sa silica gel matrix kasagaran 60 ℃, ug ang pipila ka mga kolum sa chromatography mahimong motugot sa temperatura nga 40 ℃ sa taas nga pH.
2.1.2 Polymer matrix Ang mga polymer filler kay kasagaran polystyrene-divinylbenzene o polymethacrylate. Ang ilang mga bentaha mao nga sila makaagwanta sa usa ka halapad nga pH range - sila mahimong gamiton sa han-ay sa 1 ngadto sa 14, ug sila mas makasugakod sa taas nga temperatura (mahimong moabot labaw sa 80 °C). Kung itandi sa silica-based C18 fillers, kini nga matang sa filler adunay mas lig-on nga hydrophobicity, ug ang macroporous polymer epektibo kaayo sa pagbulag sa mga sample sama sa mga protina. Ang mga disbentaha niini mao nga ang kahusayan sa kolum mas ubos ug ang kusog sa mekanikal mas huyang kaysa sa mga filler nga nakabase sa silica. 2.2 Porma sa partikulo
Kadaghanan sa modernong mga tigpuno sa HPLC mga spherical nga partikulo, apan usahay kini dili regular nga mga partikulo. Ang mga spherical nga partikulo makahatag sa ubos nga presyur sa kolum, mas taas nga kolum nga kahusayan, kalig-on ug mas taas nga kinabuhi; sa diha nga ang paggamit sa high-viscosity mobile phases (sama sa phosphoric acid) o sa diha nga ang sample nga solusyon mao ang viscous, dili regular nga mga partikulo adunay usa ka mas dako nga espesipikong ibabaw nga dapit, nga mao ang mas maayo sa bug-os nga aksyon sa duha ka hugna, ug ang presyo mao ang medyo ubos. 2.3 Gidak-on sa partikulo
Ang mas gamay nga gidak-on sa partikulo, mas taas ang kahusayan sa kolum ug mas taas ang pagbulag, apan mas grabe ang taas nga resistensya sa presyur. Ang kasagarang gigamit nga kolum mao ang 5 μm nga gidak-on sa partikulo nga kolum; kung ang kinahanglanon sa pagbulag taas, ang usa ka 1.5-3 μm filler mahimong mapili, nga makatabang sa pagsulbad sa problema sa panagbulag sa pipila ka komplikadong matrix ug multi-component sample. Ang UPLC makagamit ug 1.5 μm fillers; Ang 10 μm o mas dako nga mga punoan sa gidak-on sa partikulo sagad gigamit alang sa semi-preparative o preparative nga mga kolum. 2.4 Carbon sulod
Ang sulud sa carbon nagtumong sa proporsyon sa nahugpong nga bahin sa nawong sa silica gel, nga may kalabutan sa piho nga lugar sa nawong ug sakup sa bahin nga gibugkos. Ang taas nga carbon content naghatag og taas nga kapasidad sa kolum ug taas nga resolusyon, ug kasagaran gigamit alang sa komplikadong mga sample nga nagkinahanglan og taas nga pagbulag, apan tungod sa taas nga panahon sa interaksyon tali sa duha ka hugna, ang oras sa pag-analisar dugay; Ang ubos nga carbon content nga chromatographic nga mga kolum adunay mas mubo nga oras sa pag-analisar ug mahimong magpakita sa lain-laing mga pagpili, ug kasagaran gigamit alang sa yano nga mga sample nga nagkinahanglan og paspas nga pagtuki ug mga sample nga nagkinahanglan og taas nga tubig nga mga kondisyon sa hugna. Kasagaran, ang sulud sa carbon sa C18 gikan sa 7% hangtod 19%. 2.5 Pore gidak-on ug piho nga nawong nga dapit
Ang HPLC adsorption media kay porous nga mga partikulo, ug kadaghanan sa mga interaksyon mahitabo sa mga pores. Busa, ang mga molekula kinahanglang mosulod sa mga pores aron ma-adsorbed ug mabulag.
Ang gidak-on sa lungag ug espesipikong luna sa nawong maoy duha ka komplementaryong konsepto. Ang gamay nga gidak-on sa lungag nagpasabut nga dako nga piho nga lugar sa nawong, ug vice versa. Ang usa ka dako nga espesipikong lugar sa nawong mahimong makadugang sa interaksyon tali sa mga sample nga molekula ug mga gibugkos nga mga hugna, pagpauswag sa pagpadayon, pagdugang sa pagkarga sa sample ug kapasidad sa kolum, ug pagbulag sa mga komplikado nga sangkap. Ang bug-os nga porous nga mga filler nahisakop niini nga matang sa mga filler. Alang niadtong adunay taas nga mga kinahanglanon sa pagbulag, girekomenda nga mopili sa mga filler nga adunay dako nga espesipikong lugar sa nawong; gamay nga espesipikong lugar sa nawong makapakunhod sa presyur sa likod, makapauswag sa kahusayan sa kolum, ug makapakunhod sa oras sa panimbang, nga angay alang sa pagtuki sa gradient. Ang mga core-shell filler nahisakop sa kini nga klase sa mga filler. Sa pasiuna sa pagsiguro sa panagbulag, girekomenda nga magpili mga filler nga adunay gamay nga espesipikong lugar sa nawong alang sa mga adunay taas nga kinahanglanon sa kahusayan sa pag-analisar. 2.6 Pore volume ug mekanikal nga kusog
Ang pore volume, nailhan usab nga "pore volume", nagtumong sa gidak-on sa void volume kada yunit nga partikulo. Kini maayo nga nagpakita sa mekanikal nga kalig-on sa filler. Ang mekanikal nga kusog sa mga filler nga adunay dako nga pore volume gamay nga huyang kaysa sa mga filler nga adunay gamay nga pore volume. Ang mga filler nga adunay pore volume nga ubos o katumbas sa 1.5 mL/g kasagarang gigamit para sa HPLC separation, samtang ang fillers nga pore volume mas dako pa kay sa 1.5 mL/g kay kasagarang gigamit para sa molecular exclusion chromatography ug low-pressure chromatography. 2.7 Rate sa pagtak-op
Ang capping makapakunhod sa tailing nga mga taluktok tungod sa interaksyon tali sa mga compound ug sa nabutyag nga silanol nga mga grupo (sama sa ionic bonding tali sa alkaline compounds ug silanol nga mga grupo, van der Waals forces ug hydrogen bonds tali sa acidic compounds ug silanol nga mga grupo), sa ingon nagpalambo sa column efficiency ug peak shape. . Ang mga uncaped bonded nga mga hugna makahimo og lain-laing mga pagpili nga may kalabotan sa mga gitakpan nga mga hugna nga gihugpong, ilabi na sa mga polar sample.
- Sakup sa aplikasyon sa lainlaing mga kolum sa chromatography sa likido
Kini nga kapitulo maghulagway sa sakup sa paggamit sa lain-laing mga matang sa liquid chromatography columns pinaagi sa pipila ka mga kaso.
3.1 Reversed-phase C18 chromatographic column
Ang C18 nga kolum mao ang labing kasagarang gigamit nga reverse-phase nga kolum, nga makatagbo sa sulud ug kahugawan nga mga pagsulay sa kadaghanan sa mga organikong sangkap, ug magamit sa medium-polar, huyang nga polar ug non-polar nga mga sangkap. Ang tipo ug espesipikasyon sa C18 chromatographic column kinahanglan pilion sumala sa piho nga mga kinahanglanon sa pagbulag. Pananglitan, alang sa mga substansiya nga adunay taas nga mga kinahanglanon sa pagbulag, ang 5 μm * 4.6 mm * 250 mm nga mga detalye sagad gigamit; alang sa mga substansiya nga adunay komplikadong separation matrice ug susama nga polarity, 4 μm * 4.6 mm * 250 mm nga mga detalye o mas gagmay nga mga gidak-on sa partikulo mahimong gamiton. Pananglitan, ang tagsulat migamit ug 3 μm * 4.6 mm * 250 mm nga kolum aron makit-an ang duha ka genotoxic nga mga hugaw sa celecoxib API. Ang pagbulag sa duha nga mga sangkap mahimong moabot sa 2.9, nga maayo kaayo. Dugang pa, ubos sa pasiuna sa pagsiguro sa panagbulag, kung gikinahanglan ang paspas nga pagtuki, ang usa ka mubo nga kolum nga 10 mm o 15 mm kanunay nga gipili. Pananglitan, sa diha nga ang tagsulat migamit sa LC-MS/MS sa pag-ila sa usa ka genotoxic kahugawan sa piperaquine phosphate API, usa ka 3 μm * 2.1 mm * 100 mm kolum gigamit. Ang panagbulag tali sa kahugawan ug sa nag-unang sangkap mao ang 2.0, ug ang pagkakita sa usa ka sample mahimong makompleto sa 5 minuto. 3.2 Baliktad nga hugna nga phenyl column
Ang Phenyl column kay usa usab ka matang sa reversed-phase column. Kini nga matang sa kolum adunay kusog nga pagpili alang sa mga aromatic compound. Kung ang tubag sa mga aromatic compound nga gisukod sa ordinaryong C18 nga kolum huyang, mahimo nimong ikonsiderar ang pag-ilis sa kolum nga phenyl. Pananglitan, sa diha nga ako naghimo sa celecoxib API, ang panguna nga tubag sa sangkap nga gisukod sa phenyl column sa parehas nga tiggama ug parehas nga detalye (tanan nga 5 μm * 4.6 mm * 250 mm) mga 7 ka beses kaysa sa kolum sa C18. 3.3 Normal-phase nga kolum
Ingon usa ka epektibo nga suplemento sa nabalik nga hugna nga kolum, ang normal nga hugna nga kolum angay alang sa mga polar nga compound. Kung ang peak kusog pa kaayo kung mag-eluting nga adunay labaw pa sa 90% nga tubig nga hugna sa kolum nga nabalik nga hugna, ug bisan hapit ug nagsapaw sa solvent peak, mahimo nimong ikonsiderar ang pag-ilis sa kolum nga normal nga hugna. Kini nga matang sa kolum naglakip sa hilic column, amino column, cyano column, ug uban pa.
3.3.1 Hilic column Ang Hilic column kasagarang nag-embed sa hydrophilic nga mga grupo sa bonded alkyl chain aron mapalambo ang tubag sa polar substances. Kini nga matang sa kolum angay alang sa pag-analisar sa mga sangkap sa asukal. Ang tagsulat migamit niini nga matang sa kolum sa diha nga sa pagbuhat sa mga sulod ug mga kalambigit nga mga butang sa xylose ug sa iyang mga derivatives. Ang mga isomer sa usa ka xylose derivative mahimo usab nga maayong pagkabulag;
3.3.2 Amino column ug cyano column Ang Amino column ug cyano column nagtumong sa pagpaila sa amino ug cyano modifications sa katapusan sa bonded alkyl chain, matag usa, aron mapalambo ang selectivity sa mga espesyal nga substance: pananglitan, ang amino column usa ka maayong pagpili. alang sa pagbulag sa mga asukal, amino acid, base, ug amides; cyano column adunay mas maayo nga selectivity sa diha nga pagbulag hydrogenated ug unhydrogenated structural susama nga mga butang tungod sa presensya sa conjugated bugkos. Ang kolum sa amino ug kolum sa cyano kanunay nga mabalhin tali sa normal nga kolum sa yugto ug kolum sa reverse phase, apan dili girekomenda ang kanunay nga pagbalhin. 3.4 Kolum sa Chiral
Ang kolum sa chiral, ingon sa gisugyot sa ngalan, angay alang sa pagbulag ug pagtuki sa mga compound sa chiral, labi na sa natad sa mga parmasyutiko. Kini nga matang sa kolum mahimong makonsiderar kung ang naandan nga reverse phase ug normal nga phase column dili makab-ot ang pagbulag sa mga isomer. Pananglitan, ang tagsulat migamit ug 5 μm * 4.6 mm * 250 mm chiral column aron pagbulag sa duha ka isomer sa 1,2-diphenylethylenediamine: (1S, 2S) -1, 2-diphenylethylenediamine ug (1R, 2R) -1, 2 -diphenylethylenediamine, ug ang panagbulag tali sa duha miabot sa mga 2.0. Bisan pa, ang mga kolum sa chiral mas mahal kaysa sa ubang mga klase sa mga kolum, kasagaran 1W + / piraso. Kung adunay panginahanglan alang sa ingon nga mga kolum, ang yunit kinahanglan nga maghimo usa ka igo nga badyet. 3.5 Ion exchange nga kolum
Ang mga kolum sa pagbayloay sa ion angay alang sa pagbulag ug pagtuki sa mga gikargahan nga mga ion, sama sa mga ion, protina, nucleic acid, ug pipila ka mga sangkap sa asukal. Sumala sa tipo sa tigpuno, gibahin kini sa mga kolum sa pagbaylo sa cation, mga kolum sa pagbaylo sa anion, ug mga kolum sa pagbayloay sa cation.
Ang mga kolum sa pagbayloay sa kation naglakip sa mga kolum nga nakabase sa calcium ug mga kolum nga nakabase sa hydrogen, nga labi nga angay alang sa pagtuki sa mga sangkap nga cationic sama sa mga amino acid. Pananglitan, ang tagsulat migamit sa calcium-based nga mga kolum sa pag-analisar sa calcium gluconate ug calcium acetate sa usa ka flushing solution. Ang duha ka mga substansiya adunay lig-on nga mga tubag sa λ = 210nm, ug ang separation degree miabot sa 3.0; ang tagsulat migamit sa hydrogen-based nga mga kolum sa pag-analisar sa glucose-related nga mga butang. Daghang mga mayor nga may kalabutan nga mga substansiya - maltose, maltotriose ug fructose - adunay taas nga pagkasensitibo ubos sa differential detectors, nga adunay limitasyon sa detection nga ubos sa 0.5 ppm ug usa ka separation degree nga 2.0-2.5.
Ang mga kolum sa pagbaylo sa anion labi nga angay alang sa pag-analisar sa mga anionic nga sangkap sama sa mga organikong asido ug mga halogen ion; Ang lig-on nga mga kolum sa pagbayloay sa cation adunay mas taas nga kapasidad sa pagbayloay sa ion ug pagkapili, ug angay alang sa pagbulag ug pag-analisar sa mga komplikado nga sample.
Ang naa sa itaas usa lang ka pasiuna sa mga tipo ug mga han-ay sa aplikasyon sa daghang sagad nga mga kolum sa chromatography sa likido nga gihiusa sa kaugalingon nga kasinatian sa tagsulat. Adunay ubang mga espesyal nga matang sa chromatographic column sa aktuwal nga mga aplikasyon, sama sa dako nga pore chromatographic columns, small-pore chromatographic columns, affinity chromatography columns, multimode chromatographic columns, ultra-high performance liquid chromatography columns (UHPLC), supercritical fluid chromatography columns ( SFC), ug uban pa. Sila adunay importante nga papel sa lain-laing natad. Ang piho nga matang sa chromatographic nga kolum kinahanglan nga pilion sumala sa istruktura ug mga kabtangan sa sample, mga kinahanglanon sa pagbulag ug uban pang mga katuyoan.
Oras sa pag-post: Hun-14-2024